Anhand einer in ihren molekularen Details gut bekannten Interaktion von zwei Escherichia coli Proteinen (RpoS und RssB) werden in dem Modul verschiedene Methoden des Nachweises von Proteininteraktionen in vivo und in vitro besprochen und durchgeführt. Als Beispiel für den Nachweis einer Interaktion zwischen Proteinen in vivo verwenden wir ein bakterielles Two-Hybrid System. Für die In vitro-Experimente werden die benötigten Proteine überproduziert und gereinigt. Es werden Coelutionsexperimente durchgeführt. Der Nachweis der Proteine erfolgt über Westernblot mit spezifischen Antikörpern oder direkt durch SDS-PAGE. Zusätzlich erfolgt der Nachweis einer Interaktion durch verschiedene Crosslinker. Zusätzlich sollen verschiedene E. coli-Mutanten durch unterschiedliche Experimente eindeutig identifiziert werden. close