216461b
Laborpraktikum
SoSe 22: Produktion und biophysikalische Analyse ausgewählter Membranproteine Teil 1
Ramona Schlesinger
Hinweise für Studierende
Achtung: Das S/P kann nur zusammen mit der Lehrveranstaltung von Herrn Prof. Heberle 216462 .besucht werden.
Die Platzvergabe erfolgt zusammen.
Interessierte Studierende, ohne offiziellen Platz, können sich per e-mail (r.schlesinger@fu-berlin.de) auf eine Nachrückerliste setzen lassen. Schließen
Die Platzvergabe erfolgt zusammen.
Interessierte Studierende, ohne offiziellen Platz, können sich per e-mail (r.schlesinger@fu-berlin.de) auf eine Nachrückerliste setzen lassen. Schließen
Kommentar
Praktikumsinhalt:
- Expression zweier Membranproteine im E. coli bzw. P. pastoris system
- Affinitätschromatographische Reinigung (beinhaltet Zellaufschluss unter Druck, Solubilisierung mittels Detergenzien) und Gelfiltration am Äkta system (Demo)
- Protein-Analyse mittels UV/Vis-Spektroskopie und SDS-Gelelektrophorese
- sequenzielle Zentrifugation zur Membranproteinreinigung
- Zielgerichtete Mutagenese mittels PCR (Megaprimer Methode, QuikChange) und Klonierung in den Expressionswirt P. pastoris (beinhaltet u.a. Restriktion und Ligation von DNA, DNA Präparation, Elektotransformation, Agarose Gelelektrophorese)
- Membranprotein-Kristallisationsansätze in lipidischer kubischer Phase
- die hergestellten Membran-Proteine werden im folgenden Kurs 216462 der AG Heberle benutzt