216461b Laborpraktikum

WiSe 22/23: Produktion und biophysikalische Analyse ausgewählter Membranproteine Teil 1

Ramona Schlesinger

Hinweise für Studierende

Achtung: Das S/P kann nur zusammen mit der Lehrveranstaltung von Herrn Prof. Heberle 216462 .besucht werden.
Die Platzvergabe erfolgt zusammen.
Interessierte Studierende, ohne offiziellen Platz, können sich per e-mail (r.schlesinger@fu-berlin.de) auf eine Nachrückerliste setzen lassen. Schließen

Kommentar

Praktikumsinhalt:
  • Expression zweier Membranproteine im E. coli bzw. P. pastoris system
  • Affinitätschromatographische Reinigung (beinhaltet Zellaufschluss unter Druck, Solubilisierung mittels Detergenzien) und Gelfiltration am Äkta system (Demo)
  • Protein-Analyse mittels UV/Vis-Spektroskopie und SDS-Gelelektrophorese
  • sequenzielle Zentrifugation zur Membranproteinreinigung
  • Zielgerichtete Mutagenese mittels PCR (Megaprimer Methode, QuikChange) und Klonierung in den Expressionswirt P. pastoris (beinhaltet u.a. Restriktion und Ligation von DNA, DNA Präparation, Elektotransformation, Agarose Gelelektrophorese)
  • Membranprotein-Kristallisationsansätze in lipidischer kubischer Phase
  • die hergestellten Membran-Proteine werden im folgenden Kurs 216462 der AG Heberle benutzt
Dr. R. Schlesinger: r.schlesinger@fu-berlin.de Schließen

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